|
Dòng
|
Nội dung
|
|
1
|
Cloning human Benchwarmer gene (BNCH) harboring E164K in vector pcDNA3.1 by site-directed mutagenesis method / Nguyen Hoang Danh, Vu Minh Thiet // Tạp chí Khoa học và Công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành . - 2020. - tr. 06-11. - ISSN: 2615-9015
Ho Chi Minh city : Nguyen Tat Thanh University, 2020
6 p.
Ký hiệu phân loại (DDC): 660.6
Benchwarmer (BNCH) gene encodes an orphan transmembrane transporter belonging to the Major Facilitator Superfamily (MFS), facilitating the transport of ions, amino acids, simple sugars and recently lysolipids. The loss of BNCH function caused lethality in several animal models with neurodegeneration and senescence. At the cellular level, dysregulation of BNCH leads to adverse phenotypes of lysosome and also autophagy (i.e. dyshomeostasis, accumulation of carbohydrates and sphingolipids, and enlarged lysosome). However, the molecular function and ligand of BNCH protein remain to be unrevealed. This study aims to create a radical substitution change in human BNCH coding gene to knock out the protein functions. More specifically, lysine (K) was used to replace the glutamic acid residue 164 (E164K) which is conserved in many animals (fly, zebrafish, mouse and human) and this E164K mutation recapitulated BNCH mutant phenotype. In conclusion, BNCH harboring E164K (BNCH*) was successfully produced by site-directed mutagenesis and cloned into pcDNA.3.1 vector. The construct was transformed into E. coli OmniMAX and that provides a valuable cell assay to search for the molecular ligand of BNCH.
Số bản sách:
(0)
Tài liệu số:
(1)
|
|
2
|
Đánh giá mức độ tăng biểu hiện protein màng Benchwarmer kiểu dại và đột biến E164K được chuyển nhiễm ở tế bào nuôi cấy / Vũ Minh Thiết, Nguyễn Hoàng Danh, Đinh Hải Ngân // Tạp chí Khoa học và Công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành . - 2021. - tr. 37-42. - ISSN: 2615-9015
Tp. Hồ Chí Minh : Trường Đại học Nguyễn Tất Thành, 2021
6 tr.
Ký hiệu phân loại (DDC): 660.6
Gen Benchwarmer (BNCH) mã hóa cho protein xuyên màng thuộc họ protein vận chuyển Major Facilitator Superfamily được tìm thấy trong lysosome ở mọi tế bào động vật. Các đột biến gen BNCH gây kiểu hình bất lợi như thoái hóa thần kinh, làm ngắn vòng đời và lão hóa sớm ở nhiều sinh vật mô hình. Tuy nhiên chức năng và cơ chất của protein BNCH trên màng lysosome vẫn chưa được mô tả. Để tìm hiểu chức năng của protein này, chúng tôi đã tạo dòng plasmid mang gen mã hóa BNCH hoang dại ở người và plasmid mang BNCH chứa đột biến mất chức năng E164K. Hai plasmid trên được chuyển nhiễm vào các tế bào HEK293 để tạo hai dòng tế bào tăng cường biểu hiện protein BNCH hoang dại và BNCH đột biến E164K, làm cơ sở để phát triển mô hình nghiên cứu xác định chức năng phân tử và cơ chất vận chuyển của BNCH. Các plasmid tái tổ hợp được đưa vào tế bào HEK293 bằng kĩ thuật chuyển nhiễm lipoplex và mức độ biểu hiện protein được kiểm tra bằng Western Blot. Kết quả cho thấy cả hai biến thể này của BCNH được tăng cường biểu hiện thành công và có mức độ biểu hiện tương đương nhau trong dòng tế bào HEK293. Đây là cơ sở quan trọng để chúng tôi sử dụng hai dòng tế bào này làm mô hình nghiên cứu chức năng của BNCH trong tương lai.
Số bản sách:
(0)
Tài liệu số:
(1)
|
|
3
|
|
|
|
|
|